ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА АДФ-РИБОЗИЛИРОВАНИЯ АКТИНА ЙОТА-ТОКСИНОМ CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

“FARMAKOLOGIYA, FARMATSEVTIKA VA XALQ TABOBATI

DOLZARB MUAMMOLAR VA INNOVATSIYALAR”

ЙОТА-ТОКСИНОМ CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Ашурова Шахноза Oртик кизи

студентка 4 курса педиатрического факультета

Научный руководитель: Нарзуллаева Г.K.

ассистент кафедры медицинской биологии и генетики

ТашГосМУ Термезский филиал, г.Термез, Узбекистан Введение: Йота-токсин Clostridium perfringens - хорошо изученный бинарный токсин: А-субъединица является АДФ-рибозилтрансферазой, которая разрушает клеточный цитоскелет путём модификации R177 в молекуле Gактина, B-компонент отвечает за транслокацию А-субъединицы в клетку мишень. Цель исследование: Структурно-функциональный анализ Ia был проведён несколькими научными группами, в то время как участие ключевых аминокислот актина в реакции его модификации изучено недостаточно. Ранее на основе кристаллической структуры комплекса Iа-актин был предложен механизм АДФ-рибозилирования актина. Помимо участка модификации R177 важная роль придавалась аминокислоте D179, которая могла быть необходима для стабилизации промежуточного состояния реакции. Материалы и методы: Однако in vitro или in vivo эксперименты, подтверждающие роль этой аминокислоты, проведены не были. Таким образом, цель нашей работы была изучить роль D179 молекулы актина в модификации субстрата йота-токсином C.perfringens. Первоначально мы получили штаммы дрожжей, где актин дикого типа был заменён на молекулы с заменами R177K, D179E. Все полученные штаммы демонстрировали сходный ростовой фенотип, что указывает на функциональность всех вариантов актина. Далее мы провели in vitro 32P-АДФ-рибозилирование дрожжевых лизатов с использованием рекомбинантного Ia. Уровни модификации актина дикого типа и вариантов с заменами D179 существенно не разтличались, в то время как реакции с актиномR177K не наблюдалось. Результаты исследования: Использование очищенных препаратов показало сходный уровень кинетики реакции с актином дикого типа, актином-D179A и актином-D179E, в то время как актин-D179K модифицировался слабее. Последнее наблюдение могло быть связано с локальными структурными изменениями молекулы актина при замене отрицательно-заряженного аминокислотного остатка аспарагиновой кислоты на положительнозаряженный лизин. Вывод: Таким образом, эксперименты с дрожжевыми экстрактами и выделенным актином показывают, что аминокислотный остаток D179 не является ключевым при модификации актина и что предложенный ранее механизм АДФ-рибозилирования нуждается в уточнении.